在变性液中需加入还原剂，如2－巯基乙醇(β-ME)、二硫苏糖醇（DTT）、二硫赤藓糖醇、还原型的谷胱甘肽（GST）、半胱氨酸。还原剂的使用浓度一般是50-100mMβ-ME或DTT，也有文献使用5mM浓度。还原剂的使用浓度与蛋白二硫键的数目无关，而有些没有二硫键的蛋白加不加Chemicalbook还原剂无影响，如牛生长包涵体的增溶。对于目标蛋白没有二硫键某些包涵体的增溶，有时还原剂的使用也是必要的，可能由于含二硫键的杂蛋白影响了包涵体的溶解。同时还需加入金属鳌合剂如EDTA或EGTA，以鳌合Cu2+、Fe2+等金属离子，防止已经处于还原状态的巯基与之发生氧化反应。变性剂溶解后，蛋白质失去了生物学活性。